PCR(聚合酶链反应)是一种分子生物学技术,可以在体外快速地将特定DNA片段扩增成数以亿计的拷贝。PCR可以用于检测微生物、遗传疾病、法医学、基因工程等领域。
PCR荧光分析是一种利用荧光探针或染料来监测和定量PCR产物的方法。荧光探针或染料可以与特定的DNA序列结合或插入到DNA双链中,在受到激发光的作用下发出特定波长的荧光信号。通过测量荧光信号的强度和变化,可以判断目标DNA是否存在和数量。
PCR滤光片是一种用于PCR荧光分析仪器中的重要组件,它可以选择性地透过或反射特定波长范围内的光线,从而实现对不同荧光信号的分离和检测。PCR滤光片通常由激发滤光片、二向色镜和发射滤光片组成。
激发滤光片:它可以透过特定波长范围内的激发光,并阻挡其他波长范围内的杂散光,从而提高激发效率和信噪比。
二向色镜:它可以将激发滤光片透过的激发光反射到样品上,并将样品发出的荧光信号透过到检测器上,从而实现对激发和发射两个方向上不同波长范围内的光线进行分离。
发射滤光片:它可以透过特定波长范围内的荧 光信号,并阻挡其他波长范围内 的杂散 光,从而提高检测灵敏度和准确度。
PCR滤 光 片 的设计原则和分类
PCR滤 光片的设计原则是根据不同类型和数量的荧光探针或染料所具有 的不同激发和发射波长来确定合适 的激发、二向色镜和发射滤 光片参数,包括中心波长、半峰宽、截止深度等。 PCR滤光片具有以下特点:
高透过率:提高激发和检测效率;
高截止深度:降低杂散光干扰;
高稳定性:抵抗温度、湿度、紫外线等环境。
PCR滤光片可以按照以下方式进行分类:
按照光谱区域分类:根据滤光片透过或反射的光谱所处的区域,可以将滤光片分为紫外滤光片、可见光滤光片、近红外滤光片、红外滤光片和远红外滤光片。
按照透过特性分类:根据滤光片透过或阻挡的波长范围,可以将滤光片分为截止型滤光片、带通型滤光片和太阳光谱校正型滤光片 。截止型 滤光片可以透过低于或高于某一截止波长的所有波长,带通型滤光片可以透过某一窄波段内的所有波长,太阳全谱校正型滤光片可以使入射的太阳光与标准太阳光相匹配;
按照应用领域分类:根据不同的荧光探针或染料所需的激发和发射波段,可以将PCR荧光检测仪器中使用的荧 光分析滤光组分为多个类型和组合,例如可以有以下几种类型和组合:
FAM/SYBR Green I:激发450nm,发射520nm;
VIC/HEX/JOE/TET:激发530nm,发射560nm;
NED/TAMRA/Cy3:激发546nm,发射580nm;
ROX/Texas Red:激发585nm,发射610nm;
Cy5:激发635nm,发射670nm;
LIZ/JUN:激发650nm,发射680nm。